Morris水迷宫实验评估改善AD神经元

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01目的

观察淫羊藿苷对AD模型大鼠Ras同源基因家族成员A（RhoA）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）信号通路的作用，并探讨其改善神经元和树突损伤的作用机制。

02仪器

XR-XM型Morris水迷宫（上海欣软信息科技有限公司）；LRH-70型生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；型大小鼠脑立体定向仪（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；KD-BM型组织包埋机和KD-型石蜡切片机（浙江金华市科迪仪器设备有限公司）；BiopticQsep型核酸蛋白分析仪（江苏光鼎生物科技有限公司）；LC型荧光定量PCR仪（瑞士Roche公司）；SVE-2型垂直电泳仪及电源（武汉Servicebio公司）；Tanon型全自动数码凝胶图像分析系统（上海天能科技有限公司）；BX43型正置光学显微镜（日本Olympus公司）。

03动物分组及造模

将SD大鼠随机分为正常组和造模组，其中正常组15只，造模组65只。参考之前的文献报道[9]制备Aβ1-42悬浮液：用二甲亚基蓝（DMSO）和无菌生理盐水的混合液将Aβ1-42稀释成2.5g·L-1的混悬液，置37℃恒温孵育1周。参考文献制备[10]AD模型：用4%水合氯醛溶液经腹腔注射麻醉大鼠（mg·kg-1），解剖头部皮毛，并将其固定于脑立体定位仪。依据大鼠脑立体定位图谱，于囟门后0.9mn，矢状线左/右侧1.5mm处钻深为4.0mm的圆孔(AP=0.9,L/R=1.5，V=4.0)，钻孔后，使用微量进样器向大鼠双侧侧脑室匀速注射Aβ1-42悬浮液各2μL，注射速度为0.5μL·min-1，留针5min，退针，缝合皮毛。

04给药

造模1周后，应用Morris水迷宫实验筛选出认知损伤大鼠60只。将60只认知损伤大鼠随机分为模型组，淫羊藿苷低、中、高剂量组，另将正常大鼠设为空白组，每组15只。参考文献[9-10]确定淫羊藿苷组的给药剂量，即淫羊藿苷低、中、高剂量组分别按0.03、0.06、0.09g·kg-1的剂量灌胃淫羊藿苷配置的溶液。空白组和模型组则按10mL·kg-1的剂量灌胃等体积的生理盐水。5组连续灌胃4周，1次/d。

05Morris水迷宫实验

治疗结束后，采用Morris水迷宫实验检测大鼠的认知功能。正式测试前，连续进行5d的学习记忆训练。训练结束后进行定位航行实验和空间探查实验，其中定位航行实验统计大鼠的逃避潜伏期，空间探查实验则。统计大鼠的穿越平台次数、目标象限驻留时间及平均游泳速度。

06结论

本研究首先通过尼氏染色和高尔基染色对AD模型大鼠神经元和树突进行检测，结果发现，模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度较空白组明显减少，而淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度较模型组增加，这说明淫羊藿苷可以改善Aβ1-42诱导的神经元和树突损伤。此外，课题组还检测了脑内促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平，结果证实淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平较模型组下调，这说明淫羊藿苷可抑制Aβ1-42诱导神经炎症。综合分析上述实验结果，课题组认为淫羊藿苷可通过抑制神经炎症改善AD神经元和树突损伤。